Desenvolvimento in vitro de blastocistos de coelha. Avaliação de dois meios de cultura
Desenvolvimento “in vitro” de blastocistos de coelha. Avaliação de dois meios de cultura
Approbato, M. S.; Matheus, M.; Sala, M. A.
Ciência e Cultura 38:1241-1244, 1986.
Introdução
O objetivo deste estudo, comparar o desenvolvimento “in vitro” de blastocistos de coelha de 6 dias cultivados em meio de HAM F10 e BSM II por 6, 9 e 12h.
Material e Métodos
Utilizou-se 19 coelhas da raça Nova Zelândia, com idade entre 4 e 6 meses, cada fêmea foi cruzada com 2 machos férteis, considerado este momento como a hora “zero”. Os animais foram sacrificados 6 dias após o coito por embolia gasosa e os úteros e trompas retirados por laparotomia. Os blastocistos foram obtidos por perfusão das trompas com meio de cultura a 37,5 oC em câmara asséptica. O número total de blastocistos foi 114, 54 dos quais foram cultivados em meio HAM F10 e 60 no meio BSM II, por períodos de 6, 9 e 12 horas em ambiente de ar (95%) e CO2 (5%). O pH dos meios de cultura foi mantido em 7,3 por borbulhamento da mistura gasosa. O meio de HAM F10 foi suplementado com 5% de soro de coelha, penicilina (75 mg/l) e estreptomicina (250 mg/l). O meio de BSM II foi suplementado com 2250 mg/l de glicose, 20 % de soro de coelha, penicilina 75 mg/l e estreptomicina (250 mg/l). Após o período de cultivo os blastocistos foram fixados em metanol absoluto por 48 h, preparados conforme a técnica descrita por Moog & Lutwak Mann. O desenvolvimento dos embriões foi avaliado pelo diâmetro (grade adaptada à ocular de microscópio estereoscópico) e índice mitótico da região abembrionária. A análise estatística foi ANOVA com 2 fontes de variação: meio e tempo de cultivo.
Resultados (SUMÁRIO)
| Tabela 1 Diâmetro dos blastocistos (mm) em função do tempo, em 2 meios cultura. Approbato, USP-FMRP, 1986. |
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| Duração do cultivo (h) | ||||
| Meio Cultura | 0 | 6 | 9 | 12 |
| BSM II | 3,0 | 3,4 | 4,0 | 4,1 |
| HAM F10 | 3,0 | 3,3 | 4,1 | 3,8 |
| F = 0,771 p = n.s. | ||||
| Tabela 2 Índice mitótico (%) no pólo abembrionário dos blastocistos cultivados em 2 meios cultura em função do tempo de cultivo. Approbato, USP-FMRP, 1986. |
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| Duração do cultivo (h) | ||||
| Meio Cultura | 0 | 6 | 9 | 12 |
| BSM II | 4,2 | 3,2 | 2,3 | 1,8 |
| HAM F10 | 4,2 | 3,9 | 2,4 | 2,1 |
| F = 3,86 p = n.s. | ||||
Conclusões (SUMÁRIO)
Não se encontrou diferença significativa nos diâmetros e no índice mitótico. Entretanto houve diferença no número de blastocistos desenvolvidos no tempo de 9 h (p < 0,01) e 12 h (p< 0,001), a favor do meio MSM II.